LRRK2-IN-1 CAS 1234480-84-2 פעילות ביולוגית

בתוך מבחנה   

פראי סוג ו G2019S התמרה התוצאות ב-2.5 מקפלים גבוה יותר TR-האות הניתן לעכבות על ידיLRRK2-IN-1בצורה תלוית מינון עם ערכי IC50 של 0.08 μM ו 0.03 μM, בהתאמה [1]. LRRK2-IN-1 בעל IC50 של 45 nM עבור עיכוב של DCLK2 ומציג IC50 של גדול מ 1 μM כאשר הוערך ב הביוכימי אומר עבור AURKB, CHEK2, MKNK2, MYLK, NUAK1, ו PLK1. LRRK2-IN-1 הוא אישר לעכב את MAPK7 עם EC50 של 160 ננומטר. LRRK2-IN-1 גורם עיכוב תלוי מינון של Ser910 ו Ser935 זרחון מלווה באובדן 14-3-3 הכריכה לסוג פראי LRRK2 ו LRRK2 [G2019S] באופן מאוד מנוכר לתוך HEK293 תאים [2]. LRRK2-IN-1 הוא ציטוטוקסיים בינוני עם IC50 של 49.3 μM בתאי HepG2. LRRK2-IN-1 מציג הגנורעילות בנוכחות והיעדרות של S9 ב 15.6 ו 3.9 μM, בהתאמה [3]. LRRK2-IN-1 מעכב התפשטות, הגירה, וגורם מוות תאים עם הסימנים ההיכר של אפופטוזיס של HCT116 ו AsPC-1 תאים [4]...

ב Vivo    

LRRK2-IN-1 (100 מ"ג/ק"ג, כיתה) משרה הדרחון של LRRK2 בכליה של העכברים [2]. הזרקת Peritumoral של LRRK2-IN-1 (100 mg/ק"ג) תוצאות ירידה משמעותית בנפח הגידול ובמשקל של AsPC-1 הגידול xenografts [4].

שיטת קינאז 

Active GT-LRRK2 (1326-2527), GT-LRRK2 [G2019S] (1326-2527), GT-LRRK2 [A2016T] (1326-2527) ו GT-LRRK2 [A2016T + G2019S] (1326-2527) האנזים מטוהר עם גלוטתיון מספרד מ-HEK293 cell ליפוסט 36 h בעקבות העברה ארעית של מבנים cDNA המתאים. פפטיד קינאז assays שבוצעה בשכפול, הם מוגדרים בנפח הכולל של 40 μL המכיל 0.5 μg LRRK2 קינאז (אשר בקירוב 10% טוהר נותן ריכוז סופי של 8 ננומטר) ב 50 מ ' טריס/HCl, pH 7.5, 0.1 mM EGTA, 10 מ"מ MgCl2, 20 μM Nictide, 0.1 μM [γ-32P] ATP (500 cpm/pmol) ואת הריכוזים המצוין של מעכבי מומס DMSO. לאחר הדגירה של 15 דקות ב 30 ° c, התגובות מסתיימות על ידי הזהות 35 μL של תערובת התגובה אל P81 פוספולתאית נייר וטבילה ב 50 מ"מ חומצה זרחתית. הדגימות שוטפים בהרחבה והשילוב של [γ-32P] ATP לתוך ניקאס מסופר על ידי מונה Cerenkov. ערכי IC50 מחושבים באמצעות השימוש ב-גראפד מנסרה באמצעות ניתוח רגרסיה שאינו ליניארי.

שיטת התאים

תאים (104 תאים לבאר) הם הזרע לתוך 96-ובכן לוחית התרבות הרקמה בטרילקאט. התאים הם מתורבתים בנוכחות של LRRK2-IN-1 עם DMSO כרכב ב 0, 0.31, 0.63, 1, 2, ו 5, 10, ו 20 μM. 48 h הפוסט טיפול, 10 μL של TACS MTT מגיב מתווסף כל טוב התאים מודבטים ב 37 ° c עד מזרז גבישי כהה להיות גלוי בתאים. 100 μL של 266 mM NH4OH ב DMSO הוא התווסף לבארות והניח על צלחת שייקר במהירות נמוכה עבור דקה אחת. לאחר טלטול, הצלחת מורשה לעבור במשך 10 דקות מוגן מפני אור OD550 עבור כל באר נקרא באמצעות קורא מיקרופלייט. התוצאות ממושמעות ומחושבות כאחוז של פקד DMSO (הרכב) +/-השגיאה הסטנדרטית של הממוצע.

מנהל בעלי חיים

LRRK2-IN-1הוא התפרקה Captisol ומנוהל על ידי הזרקה הפנימי הצפק לסוג פראי זכר C57BL/6 עכברים במינון של 100 מ"ג/ק"ג. עכברים שליטה מוזרקים עם נפח שווה של Captisol. בשעה 1 ו 2 h זמן, עכברים מextinguwashed על ידי פריקה צוואר הרחם ואת רקמת המוח במהירות גזור ו-snap-קפואים חנקן נוזלי.

פניות

[1]. הרטה מנסון SB, ואח '. הקרנת הרומן LRRK2 מעכבי באמצעות תפוקה גבוהה TR-סריג שיטת הסלולר עבור LRRK2 Ser935 זירחון. PLoS 1. 2012; 7 (8): e43580. Epub 2012 אוג 28.

[2]. דנג, Xianming, ואח '. אפיון מעכב סלקטיבי של מחלת פרקינסון קינאז LRRK2. הטבע בביולוגיה כימית (2011), 7 (4), 203-205.

[3]. קושיבו ק, ואח '. חלופה ל-LRRK2-IN-1 עבור לימודי הפרמקולוגית של מחלת פרקינסון. פרמקולוגיה. 2015; 96 (5-6): 240-7.

[4]. ווייגאנט נ', ואח '. מולקולה קטנה קינאז מעכבי LRRK2-IN-1 מדגים פעילות חזקה נגד המעי הגס וסרטן הלבלב באמצעות עיכוב של doublecortin כמו קינאז 1. . מול סרטן 2014-6 במאי: 103